化學(xué)發(fā)光免疫分析儀是基于化學(xué)發(fā)光技術(shù)和免疫學(xué)原理的儀器。下面是其工作原理的簡要說明:
免疫學(xué)原理:免疫學(xué)是研究機(jī)體對外來物質(zhì)(抗原)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的科學(xué)。在化學(xué)發(fā)光免疫分析中,首先需要制備特異性抗體。抗體是免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì),能夠與目標(biāo)物(抗原)特異性結(jié)合。抗體與抗原結(jié)合后形成免疫復(fù)合物。
化學(xué)發(fā)光技術(shù):化學(xué)發(fā)光是指在化學(xué)反應(yīng)中產(chǎn)生的電子激發(fā)態(tài)經(jīng)過非輻射躍遷而發(fā)出光的現(xiàn)象。化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中常用的體系是氧化還原反應(yīng),包括活化劑和底物。
在化學(xué)發(fā)光免疫分析儀中,一般采用以下步驟:
樣品處理:將待測樣品進(jìn)行預(yù)處理,如血液、尿液等生物樣品可能需要離心、稀釋等操作以獲得合適的測量樣品。
免疫反應(yīng):將樣品與標(biāo)記有化學(xué)發(fā)光物質(zhì)(如辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(ALP)等)的抗體結(jié)合,形成抗原-抗體復(fù)合物。
清洗步驟:通過洗滌操作去除未結(jié)合的物質(zhì),以減少非特異性背景信號。
信號檢測:將產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的底物加入反應(yīng)體系中,通過與標(biāo)記的酶的反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號。
信號檢測與分析:將化學(xué)發(fā)光信號轉(zhuǎn)化為電信號進(jìn)行檢測和分析。化學(xué)發(fā)光免疫分析儀通常配備光電倍增管或光電二極管等光學(xué)檢測器,可測量光強(qiáng)度并轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的分析結(jié)果。
化學(xué)發(fā)光免疫分析儀的原理優(yōu)勢在于其高靈敏度、廣線性范圍和快速分析速度,使其成為許多生化分析領(lǐng)域的重要工具。各個品牌和型號的化學(xué)發(fā)光免疫分析儀可能在具體的實(shí)現(xiàn)細(xì)節(jié)上有所差異,但以上概述反映了其一般的工作原理。
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