常用方法:
1、直接提取法,也稱鳥槍法。
2、人工合成法:A反轉(zhuǎn)錄法,B化學(xué)合成法。
具體方法:
1、濃鹽法
2、陰離子去污劑法
3、酚/氯仿抽提法
4、水抽提法
5、醇沉淀法
6、熱裂解堿法
7、煮沸裂解法
8、納米磁珠法
9、還有超聲法、反復(fù)凍融法、酶解法及低滲裂解等等多種方法。
實(shí)驗(yàn)室常用的DNA提取方法:
1、Chelex100法:在提取DNA?xí)r,加入Chelex100(由苯乙烯、二乙烯苯共聚體組成,含有成對(duì)的亞氨基二乙酸鹽離子,起著螯合基團(tuán)作用,對(duì)多價(jià)金屬離子有極強(qiáng)親和力),螯合了金屬離子,防止了DNA降解,提高了PCR擴(kuò)增成功率。
2、有機(jī)法:指用平衡酚(又叫飽和酚)、氯仿等按不同比例混合,采用不同方法提取DNA。
3、磁珠法:(異)硫氰酸胍(GuSCN)是強(qiáng)烈蛋白變性劑,不破壞蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu),能破壞細(xì)胞膜及核膜蛋白,并使核酸酶失活,釋放DNA。磁珠可以特異性吸附DNA,與DNA結(jié)構(gòu)及片段大小無(wú)關(guān)。
4、鹽析法:溶解紅細(xì)胞后,離心沉渣用PK消化,用大約6M飽和NaCl沉淀蛋白質(zhì),離心上清中DNA用無(wú)水乙醇沉淀,用TE溶解。
5、NaOH法:強(qiáng)堿溶解、變性蛋白質(zhì),破壞細(xì)胞膜及核膜,變性核酸酶,釋放DNA,NaOH不破壞DNA一級(jí)結(jié)構(gòu)。
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